Stage 2/Instrumental Analysis & Isolation(HPLC) (16) 썸네일형 리스트형 HPLC " TROUBLE SHOOTING " Trouble shooting 을 하기 위한 첫 번째 단계는 기기 시스템에 대한 이해가 필요하다. 용매(이동상)의 bottle에서 부터 검출기 까지의 흐름을 이해하고 있어야 하며 시스템 각 단계를 하나하나 검토해야 하는 과정 또한 필요하다. 1. Pressure : Degasser , Pump , Auto-sampler , Column , Detector 2. Retention time : Solvent , Pump , Column 3. Area value : Auto-sampler , Detector 4. Peak problem : Column [1] Solvent Problem 1. Mobile phase는 항상 Filter 하여 사용한다. - 일반적으로 0... HPLC " fast analysis " 작년에 일어난 acetonitrile 파동에 따른 경제적문제와 환경오염등의 문제점이 점차적으로 증가 함으로서 과거에 규정했던 각종 시험법에 대한 수정이 불가피하게 되었다. 최소한의 용매의 사용으로 최대의 분석효과를 구하고자 하는 노력이 시도되었고 이에 발 맞추어 각종 컬럼과 기자재등이 시판되고 있다. 미국약전과 식약청 (USP & FDA) 에서는 HPLC를 이용한 분석 규정에 대해 다음과 같은 변경 사항을 지정하고 있다. 위의 표에서 알수 있듯이 몇 가지 예를 들자면 컬럼 길이는 일반적으로 쓰이고 있는 (4.5 X 150mm , 4.5 X 250mm) 의 70%의 길이를 변경 시킬수 있다. 따라서 250mm -> 75mm , 150mm -> 50mm 의 길이의 작은 컬럼을 대체 하여 사용할수 있고 I.D.. RCF ( relative centrifugal Force ) Relative centrifugal force (RCF) is converted to revolutions per minute (RPM) using the following formula. The radius, r, is equal to the distance in millimeters between the axis of rotation and the bottom of the centrifuge tube. The value calculated will be g (RCF) maximum RCF는 상대적원심력(relative centrifugal force, RCF) 단위는 *g RCF 공식 Z = r x ω2/g (원심계수, acceleration factor) r : 반경(m) ω : 각속도(m/sec.. Ion-pair chromatography IPC라 불이우는 Ion-pair chromatography 와 RPC는 많은 특징들을 공유한다. 차이점이라 하면 이동상에 Ion-pair reagent를 첨가하는 것이 대부분이다. IPC를 쓰기전에 유의해야 할 점은 앞서 설명한 RPC에 대한 분리를 충분히 수행하고, 그럼에도 불구하고 band spacing등을 개선하지 못할때 적용하야 한다는 것이다.(additional option의 성격) 왜냐하면 IPC의 경우 method development에 있어 복잡하며 기존 RPC에서 보지 못한 문제점들을 야기한다. 예를 든 figure를 여기서 다 그리고 설명할수는없으므로, 요점만 이야기 하면. 일반적인 RPC의 pH범위 2 NpS- ]] 순서로 용출되었고 , Adr+의 경우 k=0으로서 머무르지 않고 바.. IONIC SAMPLES : RP , Ion-pair and Ion-exchange HPLC 1 . Ionic sample (Ionic solute) : 1개 내지 그 이상의 acidic 하거나 basic한 성질을 지니는 작용기를 갖는 molecule을 의미한다. 이러한 성질은 silica-based column의 경우 pH range 2~8 , pH-stable column의 경우 1~14사이에서 완전히 이온화되는 것을 의미한다. 1-1 Acid/Base Equilibria & RP retention 역상 컬럼에서 solute의 성질이 소수성일수록 더 큰 머무름 시간을 갖게된다. 역상에서 산(HA) 또는 염기(B)가 이온화된 상태라면 훨씬 작은 소수성(바꿔말하면 친수성)성질을 갖게되어 결과적으로 머무름 k 값이 10-20배 줄어든다. HA , B + H+ ----> Hydrophobic (Mo.. 분리정제론 강의노트 2009 09 16일 note : stahl (swithzeland ->> Itary ) 1-[1] Column chromatography 용어 : 기기를 사용하는 경우 (column chromatograph )라고 칭함. - TLC 로 사전 예비 실험을 하는것이 보통 - 최적의 resin , 최적의 solvent 선택 ( Trial & Error ) [1]-1 Open column - 대기압 상에서 column chromatograph 실시 - sample 양에 따라 column 크기 결정 - 분리가 어려우면 column length를 증가시킨다 ( 통상, 이게 큰 문제가 되지는 않는다.) 예시> 일반적인 컬럼의 크기 ( Max diameter : 10~12Cm정도 ) ( 실리카의 경우 ) 1. 컬럼 total volume.. Mass spectrometry Nomenclature IUPAC Mass Spectrometry Nomenclature (NOT LISTED ON THE ASMS WEBSITE OF DEFINITIONS) Analyzers Mass Spectrograph - An instrument in which beams of ions are separated according to their mass-to-charge ratio, and in which the deflection and intensity of the beams are recorded directly on a photographic plate or film. Single-Focusing Mass Spectrometer - An instrument in which ions with a given mass.. Method Optimization for selection of solvent 방법 최적화의 목적은 running time의 최소화와 적절한 분리효과에 있다. 5가지의 일반적으로 사용되는 optimization techiques는 다음과 같다. 1. Eluotropic/solvent strength 2. Triangulation and related algorithmic methods 3. Scout gradients 4. Window diagrams 5. Brute-force method. 1-1. Eluotropic series Chromatographer에게 용액의 상대적인 용리정도를 알수있게 해주는 빠른 참고법중 하나이며 solvent elution strength를 나타내는데 필수적인 2가지가 eluotropic series와 solvent strength paramete.. 이전 1 2 다음
