Stage 2/Instrumental Analysis & Isolation(HPLC) 16

Biochemical analysis

Biochemical samples 1. Large bionolecules 일반적으로 3차원 구조를 가진다. - 수용액에서 안정성을 보인다. - Small molecule의 경우 분리/분석에 있어서 구조적인 요인은 미미하다. - Native protein molecule은 3,4차 구조를 가지는게 일반적이다. 2. Denaturation의 과정은 일반적으로 random coil(less folded) 이 되는 과정이다. - 분리과정중 conformation의 변화가 발생할 수 있다. 3. Primary structure - Biochemical macromolecule은 전형적으로 unit의 반복적인 형태이다. - Amino acid의 결합으로 이루어진 peptide, protein이나 oligonucl..

Trouble shooting : Retention problems

1. What controls retention? 머무름에 영향을 미치는 요소는 이동상, 고정상, 기기문제, 샘플에 주어진 환경으로 나눌수 있다. 여기서는 샘플에 영향을 미치는 환경, 이를테면 화학적 변화, degradation등과 같은 요소는 배제한다. 이동상은 변할수 있다. pH조정이나 부피조정에서 오류가 일어날수 있으며 이러한 이동상에 문제가 예상될 경우 가장 좋은 방법은 이동상을 새로이 제조하는 것이다. 몇몇 이동상은 화학적 변화에의해 degradation이 일어날수 있으며 미생물 증식에 의한 변화, 선택적인 증발 현상등이 일어날수 있다. 그림 1 Degradation of acetonitrile residues using oxidation processes 기기문제로 인한 원인이 예상될 경우에는..

GC-MS derivatization

[ 개요 ] MS 가 상용화되면서 LC/MS 나 GC/MS 가 각광받기 시작하였다. MS 는 기존의검출기에 비해 sensitivity 와 selectivity 가 뛰어난 검출기로 알려져 있다.LC/MS 와 GC/MS 는 그 이동상에서 차이를 보이는데 LC 는 liquid 를 GC 는gas 를 사용한다는 점인데 LC/MS 는 이동상이 액체이기 때문에 오염가능성이높고 GC 에 비해 그 이동상의 선택에 많은 제한이 따른다. GC/MS analysis에서는 유도체화를 많이 이용하는데, 유도체화를 시킬 경우 비휘발성 물질은 휘발성 물질로 전환이 가능하고 GC chormatogram상 분리능의 향상을 가져오고 MS에서 특정 이온을 생성시킴으로서 화합물의 정성분석이 아주 용이하며 그 감도도 매우 우수하다. 유도체화에..

AKTA purifier UV check

본기기는 CU-950 , pH/C-900 , UV-900 , P-900이 합쳐져 있다. 일체형인 본기기의 가운데를 차지하고 있는 UV kit이다. 2010 5 30일 평소와 다른 UV wavelength의 저하와 starting mode에서의 calibration의 failed 를 인지하고 점검을 시도하였다. 오른쪽의 다이얼을 돌리면 여러가지 메뉴가 나타나는데 이중 check란에 위치시키고 ok를 누른다. 여기서 ok누른다.. 그리고 나서 다시 다이얼을 돌리면 UV lamp의 지금까지의 사용시간과 wavelength의 intensity를 확인할수 있다. 일반적인 UV lamp의 수명은 4000h 이기 때문에 비교하면 남은 수명을 대략적으로 짐작할수 있다. intensity의 경우 파장별로 %로 표시가 되..

HPLC " TROUBLE SHOOTING "

Trouble shooting 을 하기 위한 첫 번째 단계는 기기 시스템에 대한 이해가 필요하다. 용매(이동상)의 bottle에서 부터 검출기 까지의 흐름을 이해하고 있어야 하며 시스템 각 단계를 하나하나 검토해야 하는 과정 또한 필요하다. 1. Pressure : Degasser , Pump , Auto-sampler , Column , Detector 2. Retention time : Solvent , Pump , Column 3. Area value : Auto-sampler , Detector 4. Peak problem : Column [1] Solvent Problem 1. Mobile phase는 항상 Filter 하여 사용한다. - 일반적으로 0...

HPLC " fast analysis "

작년에 일어난 acetonitrile 파동에 따른 경제적문제와 환경오염등의 문제점이 점차적으로 증가 함으로서 과거에 규정했던 각종 시험법에 대한 수정이 불가피하게 되었다. 최소한의 용매의 사용으로 최대의 분석효과를 구하고자 하는 노력이 시도되었고 이에 발 맞추어 각종 컬럼과 기자재등이 시판되고 있다. 미국약전과 식약청 (USP & FDA) 에서는 HPLC를 이용한 분석 규정에 대해 다음과 같은 변경 사항을 지정하고 있다. 위의 표에서 알수 있듯이 몇 가지 예를 들자면 컬럼 길이는 일반적으로 쓰이고 있는 (4.5 X 150mm , 4.5 X 250mm) 의 70%의 길이를 변경 시킬수 있다. 따라서 250mm -> 75mm , 150mm -> 50mm 의 길이의 작은 컬럼을 대체 하여 사용할수 있고 I.D..