MTT assay

 

세포독성을 측정하는 실험법중 하나로 MTT(노란색)가 효소(mitochondrial succinate dehydrogenase)반응에 의해 formazan(보라색)으로  환원되는 정도를 색의 변화로 판별하는 실험법이다.

sample처리이후 MTT(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, a tetrazole)를 분주하면 MTT는 cell내부로 들어가 Mitochondria에서 insoluble형태로 환원이 된 formazan을 만들게 된다. 여기에 DMSO같은 유기용제(either dimethyl sulfoxide, an acidified ethanol solution, or a solution of the detergent sodium dodecyl sulfate in diluted hydrochloric acid) 를 넣어주게 되면 cell이 용해되면서 마찬가지로 용해된 formazan product가 방출되게 된다. 이때 보라색을 나타내게 되며 spectrophotometer로 특정 wavelength에서 파장을 측정하게 된다.

Materials:
PBS
MTT (5 mg/ml in PBS) – filter and keep dark, prepare freshly
Acidic isopropanol (0.1N HCl in absolute isopropanol)
96-well plate (flat bottom)